Hibridação de Ácidos Nucléicos

Informações do Produto:

Autor: Francisco J. S. Lara
Páginas: 142
Formato: 14 x 21
Ano: 2002
ISBN 8586699349

Prefácio à Primeira Edição

As técnicas de biologia molecular tornaram-se ferramentas essenciais em experimentos biológicos, principalmente quando a curiosidade a respeito de um fenômeno celular está centrada em como, quando ou onde esse fenômeno ocorre. A hibridação de ácidos nucléicos desempenha um papel central e indispensável neste campo.

Este livro é coordenado por um cientista que tem vasta experiência nessa área e que sempre esteve na fronteira no uso destas técnicas, para melhor enfocar e responder suas questões biológicas. Se a alguém cabia coordenar esta obra, aguardada há alguns anos pelos pesquisadores da área, era sem dúvida o Prof. Lara.

Este livro é indicado para estudantes que se iniciam no uso destas técnicas e que querem conhecer conceitos básicos relativos a elas. Constitui-se, portanto, numa fonte de conhecimentos indispensáveis para contornar problemas que inevitavelmente aparecerão na bancada. Além disso, agrupa um conjunto de informações essenciais para se ter em um laboratório, podendo também oferecer conhecimentos básicos em um curso prático de DNA recombinante.

Os primeiros três capítulos contêm informações essenciais sobre a cinética de denaturação/renaturação de ácidos nucléicos, bem como a participação de todas as variáveis e componentes envolvidos e que afetam esse processo. O quarto capítulo descreve a quantificação de ácidos nucléicos através de exemplos claros. O capítulo que se segue mostra a importância do uso de oligonucleotídeos nas técnicas utilizadas em biologia molecular, incluindo PCR, enfatizando parâmetros matemáticos e termodinâmicos necessários para o sucesso na utilização dessas ferramentas. Finaliza a primeira parte do livro um capítulo que descreve a hibridação in situ, usando como exemplo a aplicação dessa técnica em estudos de cromossomos politênicos.

A segunda parte do livro inclui três capítulos que abordam aspectos aplicados das técnicas de hibridação. Nesses capítulos, são descritas aplicações destas técnicas na ciência básica, bem como na detecção de doenças genéticas humanas e na caracterização de indivíduos por DNA fingerprinting, campos que, cada dia mais, vêm tendo implicações fundamentais em nossas vidas.

Em suma, este livro apresenta, em uma linguagem simples, um conjunto de informações complexas, porém fundamentais para o biologista molecular.

Hamza El-Dorry

Prefácio à Segunda Edição

Nesta segunda edição, seguiremos a linha mestra anteriormente adotada, segundo a qual a linguagem que os cientistas usam para formular suas perguntas à natureza é o conjunto de técnicas que têm a sua disposição; tais técnicas têm uma duração muito menor que a ciência que lhes dá origem, segue, portanto, que um cientista deve saber a ciência em que se baseiam as técnicas usadas em seu tempo.

Dentro dessa perspectiva, a primeira parte deste livro sobre “Hibridação de Ácidos Nucléicos” visa introduzir o estudante aos aspectos teóricos dessa técnica, especialmente sob os aspectos da cinética de reações. Nessa parte, infelizmente seremos obrigados a usar equações diferenciais, com as quais estudantes de biologia estão pouco familiarizados. Esperamos que, quanto a isso, uma consulta a pessoas mais familiarizadas com cálculo diferencial possa ajudá-los. Expressões matemáticas não deixam de ser uma forma de linguagem e apresentamos simplesmente os resultados iniciais e finais dessas expressões, a fim de que as fórmulas não fiquem totalmente ininteligíveis e surpreendentes.

Na segunda parte do livro, sobre aplicações, serão apresentados problemas científicos que foram, com sucesso, atacados com as técnicas de hibridação. Novamente não apresentaremos protocolos, que existem em abundância, mas onde raramente é explicada a razão dos diferentes passos adotados.

Desejo expressar meus agradecimentos às diversas pessoas que me ajudaram. Assim, sou muito grato ao Prof. W.R. Pearson do Departamento de Bioquímica da Escola de Medicina da Universidade da Virginia, EE.UU., por sua paciência ao ensinar-me fatos fundamentais sobre hibridação de ácidos nucléicos. Sou também muito grato ao Prof. Paulo A. Otto do Instituto de Biociências, USP, pelo auxílio nas deduções matemáticas e pela correção dos erros de imprensa, que infelizmente ocorreram na primeira edição deste livro, ao Prof. J.P. Farah do Instituto de Química, USP, por valiosas discussões e à Sra. Flora Maria de Campos Fernandes Matioli pelo auxílio na preparação do texto, aos meus estudantes que fizeram meus cursos sobre “hibridação”, pela atenção que me deram, e à CAPES por uma Bolsa Acadêmica quando organizei a primeira edição. Os resultados originais apresentados em capítulos em que figuro como autor ou co-autor foram possíveis graças a auxílios para pesquisa provenientes da FAPESP, CNPq, Fundação Volkswagen da Alemanha, “National Science Foundation, U.S.A.” e do Programa BID-USP.

Francisco J. S. Lara

Conteúdo:

Sumário
Prefácio à Primeira Edição
Prefácio à Segunda Edição
TEORIA
I. Introdução – Francisco J.S. Lara
II. Renaturação do DNA – Francisco J.S. Lara
III. Reações de hibridação – Francisco J.S. Lara
IV. Hibridação quantitativa em filtros – Francisco J.S. Lara e Adilson Leite
V. Hibridação com oligonucleotídeos – Adilson Leite
VI. Hibridação in situ em cromossomos politênicos – Ann Jacob Stocker e José Mariano Amabis
VII. Utilização de marcação não radioativa para a detecção de ácidos nucléicos – Sergio Russo Matioli e Flora Maria de Campos Fernandes-Matioli
APLICAÇÕES
VIII. A técnica de PCR e suas aplicações em doenças genéticas humanas – Maria Rita Passos-Bueno e Mayana Zatz
IX. Identificação individual pelo DNA (DNA fingerprinting) - Cristina Yumi Miyaki e Anita Wajntal
X. Uso de métodos de eletroforese bi-dimensional neutro-alcalina e neutro-neutra para o mapeamento físico de origens de replicação em pufes de DNA – Maria Luisa Paçó-Larson, Paulo S. R. Coelho, Jonny Yokosawa e Francisco J.S. Lara
Apêndice. Método simplificado e econômico da hibridação DNA-DNA em filtros de nitrocelulose ou náilon – Orélio Leoncini
Índice Remissivo

Informações Adicionais: